Uitgelegd: waarom testen meerdere mensen met Covid-symptomen negatief?

Veel mensen met Covid-19-symptomen testen negatief. Er zijn verschillende waarschijnlijke redenen, zoals mutaties van het virus die ontsnappen aan detectie, kwaliteit van bemonstering en testen, en werkzaamheid van RT-PCR-kits.

Tests kunnen in verschillende stadia fout gaan, van slechte monsterafname en -opslag tot foutieve extractie en amplificatie. (Express Foto: Vishal Srivastav)

Terwijl India worstelt om het hoofd te bieden aan de ongekende vraag naar RT-PCR-tests, suggereren rapporten dat tot 20% symptomatische Covid-19-patiënten negatief testen.

Deze schijnbare trend van fout-negatieve resultaten kan ernstige patiënten ziekenhuisopname en kritieke zorg weigeren, terwijl asymptomatische patiënten zich kunnen verplaatsen en het virus kunnen verspreiden. De trend heeft experts, waaronder AIIMS-directeur Dr. Randeep Guleria, ertoe aangezet om Covid-19-behandeling aan te bevelen voor iedereen die klassieke symptomen vertoont, ongeacht de RT-PCR-resultaten.

Nieuwsbrief| Klik om de beste uitleg van de dag in je inbox te krijgen

Waarom valse negatieven?

RT-PCR-tests, beschouwd als de gouden standaard bij de diagnose van Covid-19, zijn niet bedoeld om perfect te zijn. De minimale gevoeligheid (vermogen om positieven te detecteren) die door de Indian Council of Medical Research (ICMR) wordt geëist voor het valideren van een RT-PCR-test is 95%. Dat betekent dat er tot 5% fout-negatieve resultaten worden verwacht.

Hoewel anekdotische rapporten suggereren dat het aandeel vals-negatieve resultaten in heel India toeneemt, is er nog geen onderzoek dat dit ondersteunt.

In theorie bepalen vier brede factoren de nauwkeurigheid van een RT-PCR-test: de virale belasting in de persoon, de kwaliteit van de monsterafname en -verwerking, de werkzaamheid van de testkit zelf en ook de maatstaf voor testinterpretatie.

VIRALE BELASTING: Doorgaans manifesteert Covid-19 zich adequaat op de vijfde dag van een infectiecyclus. Getest eerder na blootstelling, kan een geïnfecteerde persoon Covid-negatief blijken te zijn. Dit is misschien geen belangrijke factor achter de recente vals-negatieve trend, aangezien bepaalde Covid-19-mutanten blijkbaar vroege symptomen vertonen.

Een aantal symptomatische patiënten die vals-negatief testten in RT-PCR-assays, zijn vervolgens Covid-positief bevestigd in Bronchoalveolaire lavage (BAL)-tests die monsters van de onderste luchtwegen verzamelen via een bronchoscoop. Dit heeft geleid tot vermoedens dat bepaalde mutanten de bovenste luchtwegen omzeilen om zich op de longen te richten - een scenario dat een RT-PCR-test kan weigeren, gebaseerd op een monster dat is verzameld uit de neusholte en keel, de virale belasting die nodig is voor een nauwkeurig resultaat.

cokie roberts nettowaarde

CAPACITEIT EXPLOSIE: Het aantal Covid-testlaboratoria in India steeg van 14 in februari 2020 tot meer dan 2.400 in april 2021. Een dergelijke snelle uitbreiding vereiste de goedkeuring van honderden laboratoria voor RT-PCR-testen en het snel opleiden van duizenden technici.

Als voorzorgsmaatregel somde ICMR in juli 2020 30 kwaliteitscontrolelaboratoria op om alle goedgekeurde Covid-laboratoria te controleren. Sindsdien zijn er nog 8 QC-labs bijgekomen. Bronnen in meerdere laboratoria in drie staten zeiden echter dat er slechts enkele inspecties van faciliteiten en instrumenten plaatsvonden.

Idealiter zou periodiek een mix van positieve en negatieve monsters willekeurig uit elk laboratorium moeten worden gehaald om opnieuw te worden getest. Is dat ooit gedaan? Ja. Is dat consequent gedaan? Nee, zei een wetenschapper van een ICMR-instituut die niet bevoegd is om de media te woord te staan.

Benaderd voor periodieke laboratoriummonitoring en kwaliteitsnalevingsgegevens sinds juli 2020, bleven ICMR en een aantal QC-labs stil.

MENSELIJK ELEMENT: Tests kunnen in verschillende stadia misgaan - van slechte monsterafname en -opslag tot foutieve extractie en amplificatie. Alle RT-PCR-kits bevatten een interne controle (IC) om te beschermen tegen een scenario waarin geen RNA wordt geëxtraheerd/geamplificeerd, wat leidt tot een vals-negatief. De IC kan exogeen of endogeen zijn. Het is exogeen wanneer een kunstmatig RNA-sjabloonmolecuul aan elk monster wordt toegevoegd vóór RNA-extractie. De test wordt als ongeldig beschouwd wanneer het synthetische RNA niet wordt gedetecteerd na extractie en een nieuwe test wordt voorgeschreven. En een endogene controle maakt gebruik van een menselijk 'huishoudelijk'-gen dat in het monster aanwezig is; zijn niet-detectie na de RNA-extractieprocedure maakt de test ongeldig.

Een menselijk huishoudgen zorgt ook voor de kwaliteit van het monster... Maar meer dan 75% RT-PCR-kits op de Indiase markt gebruiken de goedkopere exogene interne controles, zei een moleculair bioloog uit Mumbai.

In de SOP van april 2020 van ICMR op RT-PCR stond dat exogene controle voor extractie kan worden genegeerd, omdat dit niet de kwaliteit van het verzamelde monster weerspiegelt. Het adviseerde afzonderlijk RNase P of een ander menselijk huishoudgen... parallel te laten lopen in een aparte buis... (om) zowel de kwaliteit van het verzamelde monster als de extractieprocedure te controleren.

In mei 2020 specificeerde de megaaanbesteding van ICMR/HLL voor RT-PCR-kits soortgelijke vereisten. Een aantal fabrikanten voerde aan dat verschillende bedrijven verschillende interne controles gebruiken, waaronder exogene controles die zijn goedgekeurd door regelgevende instanties zoals FDA en CEIVD, en dat ongunstige selectie op basis van huishoudgenen eerlijke concurrentie zou ontmoedigen. Uiteindelijk werd de aanbesteding herzien om zowel endogene als exogene opties voor interne controle op te nemen.

VIRALE MUTATIE: Een RTR-PCR-test richt zich op specifieke gebieden van een of meer virale genen om de aanwezigheid ervan te detecteren. Een test kan vals-negatieve resultaten opleveren als er een mutatie optreedt in het beoordeelde segment van het genoom. Tests die meerdere genetische doelen gebruiken, zoals die in India worden gebruikt, laten zich minder snel voor de gek houden door mutaties.

gavin gratis networth

Regelgevers zoals de Amerikaanse FDA houden routinematig toezicht op de impact van mutaties op RT-PCR-tests Terwijl experts zoals Dr. Rakesh Mishra, directeur van Hyderabad's Center for Cellular and Molecular Biology (CCMB), vinden dat ICMR een soortgelijke oefening zou moeten starten, is het misschien niet gemakkelijk om realtime meer dan 200 in India goedgekeurde RT-PCR-kits te controleren tegen opkomende mutaties.

Ten eerste heeft geen enkele fabrikant (of zal) de gedetailleerde sequenties van zijn tests bekendgemaakt. Bij het indienen voor validatie bij ICMR vermelden ze alleen de doelgenen en niet de primersequentie, zei een senior onderzoeker bij het ministerie van Volksgezondheid.

Tot nu toe is er echter reden om redelijk zeker te zijn, zelfs als er geen realtime werkzaamheidscontrole is. Tot nu toe hebben Covid-19-varianten voornamelijk S-gen (spike-eiwit) mutaties. De meerderheid van de kits hier gebruiken geconserveerde (onveranderde) regio's van doelen, zei dr. Shanta Dutta, directeur van het National Institute of Cholera and Enteric Diseases (NICED), Kolkata.

Prijs crash

In één jaar tijd daalde de prijs van de RT-PCR-kit van meer dan Rs 1.100 tot minder dan Rs 40. Sinds de vrijstelling van invoerrechten in oktober 2020 werd ingetrokken, verlieten de meeste buitenlandse merken de Indiase markt vanwege de extra kosten van 15%. Ook een aantal Indiase merken hebben geweigerd om onder de 100 roepies te verkopen. Velen hebben toegewijde zakelijke klanten gevonden die het niet erg vinden om een ​​beetje extra te betalen om de kwaliteit te garanderen. Sommige bieden zelfs meerdere PCR-kits aan tegen verschillende prijsniveaus.

Hoewel niemand het op de plaat zegt, twijfelen velen aan de kwaliteit van de goedkopere concurrentie. Het tegenbeeld is dat elke testkit die op de markt verkrijgbaar is, voldoet aan de validatiebenchmarks van ICMR en dat elke prijzenoorlog uiteindelijk de consument ten goede komt.

Niet iedereen is echter overtuigd. De overeenkomstige daling van de kosten van de laboratoriumtest is van Rs 4.500 naar Rs 800. Trouwens, weet iemand die haar lokale laboratorium bezoekt voor een Covid-test welke kit wordt gebruikt? Hoeveel laboratoria besteden Rs 100 als ze weg kunnen komen met het gebruik van een Rs-40-kit? zei een van de eerste Indiase fabrikanten van Covid PCR-kits.

WORD NU LID:The Express Explained Telegram Channel

De Ct-waarde

Een RT-PCR-test amplificeert het nucleïnezuur dat uit het monster is geëxtraheerd om het nucleïnezuur te detecteren dat specifiek is voor het Covid-19-virus. De versterking gebeurt in cycli met een drempelwaarde (Ct). Het is duidelijk dat hoe hoger de virale aanwezigheid/belasting, hoe lager de Ct-waarde of het aantal amplificatiecycli dat nodig is om het detecteerbaar te maken.

ICMR stelde de Ct-waarde in op 35 voor negatieve resultaten. Verder wordt elk spoor van mogelijk aanwezig virus als verwaarloosbaar beschouwd en wordt het monster Covid-negatief geacht.

Maar bepaalde staten, zoals Maharashtra, probeerden de toelaatbaarheidsgrens te verleggen door een Ct-waarde van 24 voor te stellen. Aangezien dit potentieel een groot aantal mensen met een kwantitatief lagere maar klinisch significante virale belasting zou uitsluiten, herhaalde de ICMR zijn standpunt over een Ct-waarde van 35 .

Er is echter weinig duidelijkheid als alle staten dezelfde Ct-benchmark volgen. Volgens senior executives van ten minste twee multi-state laboratoriumnetwerken hebben ze tegenstrijdige en soms ongerechtvaardigde mondelinge instructies ontvangen over dergelijke testparameters. Zelfs een moleculaire test is niet immuun voor subjectieve vooroordelen.

Deel Het Met Je Vrienden: